限制性内切酶 (Restriction endonucleases) 是一类识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的核酸内切酶，简称限制酶 (Restriction enzymes)。
根据其反应的必须因子、识别序列与切割位点、以及蛋白本身特性，可分为如下五大类：
1 常用的基因工程限制酶都属于Type II 型。
2 同一种限制酶可能属于不同的亚型。
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